什么是肌酐？

肌酐是一種低分子量的含氮化合物，由肌肉組織中的磷酸肌酸和肌酸通過非酶促、不可逆的脫磷酸反應(yīng)生成的代謝終產(chǎn)物。肌酐僅由腎小球濾過進入原尿，不被腎小管重吸收。血中的肌酐來源包括外源性和內(nèi)源性兩部分，內(nèi)源性肌酐每日生成量幾乎保持恒定，嚴格控制外源性肌酐的攝入時，血肌酐濃度為穩(wěn)定值，因此，血清肌酐濃度是評價腎小球濾過功能的重要指標。

肌酐測定臨床意義

1.血清肌酐：改善全球腎臟病預(yù)后組織（KDIGO）指南推薦主要基于血清肌酐（Scr)計算的估算的腎小球濾過率（GFR），作為腎功能評估和腎損傷篩查的指標。

2.尿液肌酐：尿肌酐與血清肌酐同時測定，用于計算肌酐清除率，以評價腎小球的濾過功能；尿微量白蛋白與尿肌酐比值（ACR）可作為慢性腎病診斷標志物。《中國糖尿病腎臟疾病防治指南》推薦2型糖尿病患者每年應(yīng)至少進行一次UACR和eGFR檢測，以便早期發(fā)現(xiàn)糖尿病腎臟疾病（DKD）。

肌酐檢測方法學(xué)

目前檢測肌酐的方法學(xué)主要有苦味酸法、酶法、放射性核素稀釋質(zhì)譜法、高效液相色譜法、毛細管電泳法和電極法等。

1. 苦味酸法（Jaffe法）

是檢測肌酐最經(jīng)典的方法，其原理是在堿性條件下肌酐與苦味酸反應(yīng)生成橙紅色結(jié)合物，在505-520nm波長處測其吸光度來反映肌酐的水平。該方法的優(yōu)點是成本地低廉，操作簡便，缺點是特異性不強，抗干擾能力差，易受血中很多“假肌酐”的干擾，如丙酮酸、膽紅素、乙酰乙酸鹽、葡萄糖、蛋白質(zhì)等，這些物質(zhì)也會與苦味酸發(fā)生有色反應(yīng)從而影響肌酐的檢測結(jié)果。雖然有些臨床實驗室使用改良的苦味酸法，但均或多或少存在各種問題。

2. 酶法

酶法主要包括肌氨酸氧化酶法與肌酐亞胺水解酶法。肌氨酸氧化酶法是通過肌酐酶的作用使肌酐水解成肌酸和尿素，肌酸又可經(jīng)一系列反應(yīng)生成H2O2等，最后偶聯(lián)Trinder反應(yīng)形成的醌亞胺色素與肌酐的濃度成正比，可用比色測定。肌氨亞胺水解酶法是通過肌酐亞氨基水解酶將肌酐水解，經(jīng)一系列反應(yīng)生成谷氨酸，通過測定340nm處的吸光度降低速率計算肌酐水平。酶法抗干擾能力相對較好且交叉污染相對少，但試劑成本相對較高。

3.同位素稀釋質(zhì)譜法

該方法的原理是將已知豐度與質(zhì)量的同位素稀釋劑與樣本混合，用質(zhì)譜檢測混合前后樣本豐度的變化，求得樣本中某種元素水平的方法。該方法具有很高的特異性，而且精密度與準確度也非常好，不產(chǎn)生系統(tǒng)誤差，是檢驗臨床指標量值最常用的參考方法，但由于該方法的檢測成本較高和輻射污染等問題，通常只用于產(chǎn)生一級參考測量程序、評價參考方法和對自己標準品定值。

4.高效液相色譜法（HPLC）

HPLC通過陽離子交換層析柱將肌酐分離出來，再測得其在233 nm處的A值，從而檢測出血肌酐水平。該方法的精密度和準確度高，特異型好，但檢測過程比較繁瑣，并不適合用于臨床大批量樣本的檢測，通常作為肌酐測定的參考方法。

5.毛細管電泳法

毛細管電泳法是通過毛細管電泳將血清中的肌酐分離出來，然后檢測234 nm處的吸光度計算肌酐值。該方法效率高，樣本用量少，分析速度快，并可排除體內(nèi)“假肌酐”對血肌酐測定的干擾。但毛細管內(nèi)壁易吸附蛋白質(zhì)，導(dǎo)致該法的重復(fù)性較差，因此不適用于臨床常規(guī)檢測。

6.電極法

電極法是通過半酶法，利用離子選擇性電極對肌酐進行測定的一種方法。該方法雖然操作比較簡單，速度也較快，但抗內(nèi)源性物質(zhì)干擾的能力較差，故在臨床上也并不常用。

我國室間質(zhì)評情況

目前在國家藥監(jiān)局網(wǎng)站獲得肌酐檢測注冊證的廠家所采用的方法學(xué)主要為苦味酸法和酶法，其中注冊苦味酸的廠家約60余家，注冊酶法的廠家約有200余家，參加室間質(zhì)評的單位主要也是使用的苦味酸法和酶法。

通過對全國1402家實驗室發(fā)放的5個不同濃度批次的質(zhì)評物進行肌酐檢測的室間質(zhì)評調(diào)查，按照2種檢測方法（苦味酸法和酶法）和11套檢測系統(tǒng)分組，結(jié)果分析中，苦味酸法組CV范圍為1.03～18.23%，酶法組CV為1.5～8.08%，肌酐不同檢測系統(tǒng)試驗室間變異情況酶法組優(yōu)于苦味酸法組。

在廣東2014年室間質(zhì)評中，第一次室間質(zhì)評有71家實驗室使用苦味酸法，52家使用酶法，第二次有37家使用苦味酸法，64家使用酶法。第一次室間質(zhì)評苦味酸法和酶法能力比對檢驗（PT）合格率分別為57.46%和83.85%，第二次分別為83.78%和97.19%，苦味酸法檢測的變異系數(shù)在6.67%～19.26之間，酶法變異系數(shù)在3.78%～11.43%之間，可以看出酶法檢測肌酐的質(zhì)量明顯優(yōu)于苦味酸法。

在對天津109家實驗室室間質(zhì)評結(jié)果分析中，測定高值質(zhì)控品苦味酸法和酶法平均CV分別為8.7%和3%，低值質(zhì)控平均CV分別為34.3%和9.3%，可見基質(zhì)效應(yīng)對肌酐測定結(jié)果尤其是苦味酸法檢測低值質(zhì)控影響很大，酶法測定結(jié)果顯著優(yōu)于苦味酸法。

小結(jié)

通過肌酐注冊和實驗室使用情況來看，目前檢測肌酐主要使用的方法學(xué)為苦味酸法和酶法，兩種方法各有優(yōu)劣勢，苦味酸法檢測成本低，但干擾因素多，而酶法雖成本更高，但結(jié)果準確性和重復(fù)性更好，線性范圍更寬，因此推薦有條件的實驗室可使用酶法檢測肌酐。

國賽現(xiàn)已獲肌酐檢測試劑盒注冊證，使用的方法為肌氨酸氧化酶法，用于Aristo U和Aristo Ur檢測系統(tǒng)，可聯(lián)合多種散射比濁法尿特定蛋白在同一臺儀器上檢測，同時出具ACR和各尿蛋白的檢測結(jié)果，并可以尿液流水線軌道聯(lián)機，實現(xiàn)一管尿液多項檢測，為腎臟病的診斷提供更簡便、更完善的解決方案。

參考文獻

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