什么是肌酐？

肌酐是一種低分子量的含氮化合物，由肌肉組織中的磷酸肌酸和肌酸通過(guò)非酶促、不可逆的脫磷酸反應(yīng)生成的代謝終產(chǎn)物。肌酐僅由腎小球?yàn)V過(guò)進(jìn)入原尿，不被腎小管重吸收。血中的肌酐來(lái)源包括外源性和內(nèi)源性兩部分，內(nèi)源性肌酐每日生成量幾乎保持恒定，嚴(yán)格控制外源性肌酐的攝入時(shí)，血肌酐濃度為穩(wěn)定值，因此，血清肌酐濃度是評(píng)價(jià)腎小球?yàn)V過(guò)功能的重要指標(biāo)。

肌酐測(cè)定臨床意義

1.血清肌酐：改善全球腎臟病預(yù)后組織（KDIGO）指南推薦主要基于血清肌酐（Scr)計(jì)算的估算的腎小球?yàn)V過(guò)率（GFR），作為腎功能評(píng)估和腎損傷篩查的指標(biāo)。

2.尿液肌酐：尿肌酐與血清肌酐同時(shí)測(cè)定，用于計(jì)算肌酐清除率，以評(píng)價(jià)腎小球的濾過(guò)功能；尿微量白蛋白與尿肌酐比值（ACR）可作為慢性腎病診斷標(biāo)志物?！吨袊?guó)糖尿病腎臟疾病防治指南》推薦2型糖尿病患者每年應(yīng)至少進(jìn)行一次UACR和eGFR檢測(cè)，以便早期發(fā)現(xiàn)糖尿病腎臟疾病（DKD）。

肌酐檢測(cè)方法學(xué)

目前檢測(cè)肌酐的方法學(xué)主要有苦味酸法、酶法、放射性核素稀釋質(zhì)譜法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法和電極法等。

1. 苦味酸法（Jaffe法）

是檢測(cè)肌酐最經(jīng)典的方法，其原理是在堿性條件下肌酐與苦味酸反應(yīng)生成橙紅色結(jié)合物，在505-520nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度來(lái)反映肌酐的水平。該方法的優(yōu)點(diǎn)是成本地低廉，操作簡(jiǎn)便，缺點(diǎn)是特異性不強(qiáng)，抗干擾能力差，易受血中很多“假肌酐”的干擾，如丙酮酸、膽紅素、乙酰乙酸鹽、葡萄糖、蛋白質(zhì)等，這些物質(zhì)也會(huì)與苦味酸發(fā)生有色反應(yīng)從而影響肌酐的檢測(cè)結(jié)果。雖然有些臨床實(shí)驗(yàn)室使用改良的苦味酸法，但均或多或少存在各種問(wèn)題。

2. 酶法

酶法主要包括肌氨酸氧化酶法與肌酐亞胺水解酶法。肌氨酸氧化酶法是通過(guò)肌酐酶的作用使肌酐水解成肌酸和尿素，肌酸又可經(jīng)一系列反應(yīng)生成H2O2等，最后偶聯(lián)Trinder反應(yīng)形成的醌亞胺色素與肌酐的濃度成正比，可用比色測(cè)定。肌氨亞胺水解酶法是通過(guò)肌酐亞氨基水解酶將肌酐水解，經(jīng)一系列反應(yīng)生成谷氨酸，通過(guò)測(cè)定340nm處的吸光度降低速率計(jì)算肌酐水平。酶法抗干擾能力相對(duì)較好且交叉污染相對(duì)少，但試劑成本相對(duì)較高。

3.同位素稀釋質(zhì)譜法

該方法的原理是將已知豐度與質(zhì)量的同位素稀釋劑與樣本混合，用質(zhì)譜檢測(cè)混合前后樣本豐度的變化，求得樣本中某種元素水平的方法。該方法具有很高的特異性，而且精密度與準(zhǔn)確度也非常好，不產(chǎn)生系統(tǒng)誤差，是檢驗(yàn)臨床指標(biāo)量值最常用的參考方法，但由于該方法的檢測(cè)成本較高和輻射污染等問(wèn)題，通常只用于產(chǎn)生一級(jí)參考測(cè)量程序、評(píng)價(jià)參考方法和對(duì)自己標(biāo)準(zhǔn)品定值。

4.高效液相色譜法（HPLC）

HPLC通過(guò)陽(yáng)離子交換層析柱將肌酐分離出來(lái)，再測(cè)得其在233 nm處的A值，從而檢測(cè)出血肌酐水平。該方法的精密度和準(zhǔn)確度高，特異型好，但檢測(cè)過(guò)程比較繁瑣，并不適合用于臨床大批量樣本的檢測(cè)，通常作為肌酐測(cè)定的參考方法。

5.毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳法是通過(guò)毛細(xì)管電泳將血清中的肌酐分離出來(lái)，然后檢測(cè)234 nm處的吸光度計(jì)算肌酐值。該方法效率高，樣本用量少，分析速度快，并可排除體內(nèi)“假肌酐”對(duì)血肌酐測(cè)定的干擾。但毛細(xì)管內(nèi)壁易吸附蛋白質(zhì)，導(dǎo)致該法的重復(fù)性較差，因此不適用于臨床常規(guī)檢測(cè)。

6.電極法

電極法是通過(guò)半酶法，利用離子選擇性電極對(duì)肌酐進(jìn)行測(cè)定的一種方法。該方法雖然操作比較簡(jiǎn)單，速度也較快，但抗內(nèi)源性物質(zhì)干擾的能力較差，故在臨床上也并不常用。

我國(guó)室間質(zhì)評(píng)情況

目前在國(guó)家藥監(jiān)局網(wǎng)站獲得肌酐檢測(cè)注冊(cè)證的廠家所采用的方法學(xué)主要為苦味酸法和酶法，其中注冊(cè)苦味酸的廠家約60余家，注冊(cè)酶法的廠家約有200余家，參加室間質(zhì)評(píng)的單位主要也是使用的苦味酸法和酶法。

通過(guò)對(duì)全國(guó)1402家實(shí)驗(yàn)室發(fā)放的5個(gè)不同濃度批次的質(zhì)評(píng)物進(jìn)行肌酐檢測(cè)的室間質(zhì)評(píng)調(diào)查，按照2種檢測(cè)方法（苦味酸法和酶法）和11套檢測(cè)系統(tǒng)分組，結(jié)果分析中，苦味酸法組CV范圍為1.03～18.23%，酶法組CV為1.5～8.08%，肌酐不同檢測(cè)系統(tǒng)試驗(yàn)室間變異情況酶法組優(yōu)于苦味酸法組。

在廣東2014年室間質(zhì)評(píng)中，第一次室間質(zhì)評(píng)有71家實(shí)驗(yàn)室使用苦味酸法，52家使用酶法，第二次有37家使用苦味酸法，64家使用酶法。第一次室間質(zhì)評(píng)苦味酸法和酶法能力比對(duì)檢驗(yàn)（PT）合格率分別為57.46%和83.85%，第二次分別為83.78%和97.19%，苦味酸法檢測(cè)的變異系數(shù)在6.67%～19.26之間，酶法變異系數(shù)在3.78%～11.43%之間，可以看出酶法檢測(cè)肌酐的質(zhì)量明顯優(yōu)于苦味酸法。

在對(duì)天津109家實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)結(jié)果分析中，測(cè)定高值質(zhì)控品苦味酸法和酶法平均CV分別為8.7%和3%，低值質(zhì)控平均CV分別為34.3%和9.3%，可見(jiàn)基質(zhì)效應(yīng)對(duì)肌酐測(cè)定結(jié)果尤其是苦味酸法檢測(cè)低值質(zhì)控影響很大，酶法測(cè)定結(jié)果顯著優(yōu)于苦味酸法。

小結(jié)

通過(guò)肌酐注冊(cè)和實(shí)驗(yàn)室使用情況來(lái)看，目前檢測(cè)肌酐主要使用的方法學(xué)為苦味酸法和酶法，兩種方法各有優(yōu)劣勢(shì)，苦味酸法檢測(cè)成本低，但干擾因素多，而酶法雖成本更高，但結(jié)果準(zhǔn)確性和重復(fù)性更好，線性范圍更寬，因此推薦有條件的實(shí)驗(yàn)室可使用酶法檢測(cè)肌酐。

國(guó)賽現(xiàn)已獲肌酐檢測(cè)試劑盒注冊(cè)證，使用的方法為肌氨酸氧化酶法，用于Aristo U和Aristo Ur檢測(cè)系統(tǒng)，可聯(lián)合多種散射比濁法尿特定蛋白在同一臺(tái)儀器上檢測(cè)，同時(shí)出具ACR和各尿蛋白的檢測(cè)結(jié)果，并可以尿液流水線軌道聯(lián)機(jī)，實(shí)現(xiàn)一管尿液多項(xiàng)檢測(cè)，為腎臟病的診斷提供更簡(jiǎn)便、更完善的解決方案。

參考文獻(xiàn)

[1] 王正印，尹元，王偉靈. 肌酐檢測(cè)方法及常見(jiàn)藥物對(duì)肌酐檢測(cè)干擾的研究進(jìn)展[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué). 2018,33（4）：370-373.

[2] 譚紅軍，羅春華，楊林，等. 肌酐檢測(cè)方法學(xué)評(píng)價(jià)機(jī)器研究進(jìn)展[J]. 系統(tǒng)醫(yī)學(xué)，2019,4（8）：191-194.

[3] 張東玲，闞耀東. 肌酐測(cè)定的方法學(xué)進(jìn)展[J]. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2006,27（6）：521-523

[4] 楊雪，王薇，張傳寶，等. 我國(guó)肌酐檢測(cè)系統(tǒng)性能分析[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué). 2012,27（12）：989-994.

[5] 蔣敏，王奇玲，龐韜，等. 苦味酸法和酶法測(cè)定血清肌酐室間質(zhì)評(píng)現(xiàn)狀分析[J]. 實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué). 2014,32（4）：421-422